- 赵振兴;范奇璇;王思元;董铮;胡中泽;周涛;张永江;
番茄褐色皱纹果病毒(tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)严重威胁番茄等茄科园艺作物的生产安全。本研究根据其外壳蛋白(coat protein,CP)基因及其同属病毒的差异序列,设计了特异性重组酶介导等温核酸扩增技术(recombinase-aided amplification,RAA)引物,并基于CRISPR/Cas12a的设计原则,设计了靶向RT-RAA扩增产物的CRISPR RNA(crRNA)。通过优化获得了检测信号最强的反应体系,其中报告基因FQ终浓度为600nmol/L、Cas12a和crRNA终浓度分别为200nmol/L和1000nmol/L,最终总反应时间仅为30 min。该方法可特异性检测ToBRFV,对携带ToBRFV的番茄样品RNA检测灵敏度为RT-PCR和RT-qPCR的10000和100倍,检测限为3.46fg/μL。阳性样品验证结果显示,本研究建立的RT-RAA-CRISPR/Cas12a检测技术可以在不同来源的辣椒、番茄侵染的植物叶片、果实及种子中检测到ToBRFV,表明该技术可用于番茄褐色皱纹果病毒的快速、灵敏的可视化检测。
2024年03期 v.38 14-20页 [查看摘要][在线阅读][下载 1214K] [下载次数:508 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:2 ] |[阅读次数:0 ] - 马欣欣;方亦午;郑国明;顾建锋;
对韩国进境的一批松木包装检疫时,发现一种滑刃属线虫种群。其形态特征与柳滑刃线虫[(Aphelenchoides salixae)]近似,核糖体28S基因D2-D3区序列与GenBank中该种线虫的相似度高达100%,系统进化树显示木包装截获的线虫种群均与柳滑刃线虫种群聚在一个分支上,鉴定为柳滑刃线虫。该线虫2017在伊朗被首次发现,并于伊朗其他省份被发现报道,在其他国家未见报道。这是我国首次截获该线虫。
2024年03期 v.38 21-25页 [查看摘要][在线阅读][下载 1213K] [下载次数:77 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ] - 徐飞;龚静如;于翠;马丁;张卫东;易建平;
从荷兰进境风信子种球软腐症状组织处分离到一株分离物2018-5,对分离物进行PCR检测、荧光PCR检测、16SrRNA序列分析、多位点序列分析和致病性测试。分离物在NA平板上菌落淡黄褐色,扁平,圆形,边缘不规则。测试结果表明,常规PCR和荧光PCR检测均为阳性;16SrRNA、rpoS、rplB、recA、purA、gapA、gyrA、fusA、dnaX序列和达旦提狄克氏菌达旦提亚种(Dickeya dadantii subsp.dadantii)菌株NCPPB898(CP023467)的序列相似性分别为99.93%,99.55%,100%,95.68%,99.35%,99.34%,99.37%,99.86%,99.59%;基于8个看家基因(rpoS、rplB、recA、purA、gapA、gyrA、fusA和dnaX)的系统发育树显示,分离物2108-5与Dickeya dadantii subsp.dadantii处于同一分支;人工接种风信子叶片和甘薯幼茎都能引起腐烂反应。根据试验结果将分离物2018-5鉴定为达旦提狄克氏菌达旦提亚种(Dickeya dadantii subsp.dadantii)。
2024年03期 v.38 26-33页 [查看摘要][在线阅读][下载 1432K] [下载次数:75 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:1 ] |[阅读次数:0 ] - 刘玮琦;李兰;梁靓;刘振伟;赵畅;陈超;丛日赫;王旭;
为建立快速、灵敏检测菲利普木蠹象的重组酶聚合酶扩增检测(RPA)方法,本研究利用菲利普木蠹象的COI基因序列,设计筛选特异性引物PH3,并对引物特异性和灵敏度进行检测。结果表明,设计的引物能够特异检测出菲利普木蠹象,该引物检测菲利普木蠹象的灵敏度为0.045 ng/μL。所建立的RPA方法特异性强、灵敏度高,可用于口岸一线对菲利普木蠹象的检测。
2024年03期 v.38 34-39页 [查看摘要][在线阅读][下载 1953K] [下载次数:114 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ] - 王澍;刘保军;张李娅;单佳祁;白剑宇;李克梅;
为明确吐鲁番葡萄病毒病发生情况及感染病毒种类,对吐鲁番葡萄种植区的葡萄病毒侵染情况进行调查,依据高通量测序结果,基于田间调查结合RT-PCR技术对采集的疑似葡萄病毒样本进行检测。结果表明,吐鲁番葡萄病毒病的症状一般在6-7月份左右出现;采集的183份样品中共检测到5种病毒,分别为葡萄克孜尔萨帕克病毒(GKSV)、葡萄卷叶相关病毒4(GLRaV-4)、葡萄浆果内坏死病毒(GINV)、葡萄蚕豆萎蔫病毒(GFabV)、沙地葡萄茎痘相关病毒(GRSPaV),总检出率分别为8.20%、30.60%、18.58%、10.92%、25.68%,其中,GLRaV-4检出率为最高;葡萄病毒复合侵染发生普遍,有两种或3种复合侵染类型,总检出率分别为27.32%、8.74%。对吐鲁番葡萄病毒病进行调查与鉴定,明确了葡萄病毒种类,掌握了不同葡萄种植区葡萄病毒的发生现状及病毒携带情况,为吐鲁番葡萄病毒病的早期监测和防控提供理论指导。
2024年03期 v.38 40-46页 [查看摘要][在线阅读][下载 1391K] [下载次数:211 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:4 ] |[阅读次数:0 ]